引加生物的T4 RNA連接酶2(截短型KQ)是在大腸桿菌中重組表達(dá)的引入了R55K和K227Q雙突變的截短型的T4 RNA連接酶2。
該酶可特異性地將DNA或RNA的預(yù)腺苷酰化的5’末端連接到RNA的3’OH末端,在連接過(guò)程中不消耗ATP進(jìn)行反應(yīng),但需要預(yù)腺苷酰化接頭以開(kāi)啟反應(yīng)。R55K突變提高了酶的連接活性,而K227Q突變后大大降低了該酶原本所含有的輕微的從5’預(yù)腺苷酰化的DNA接頭(AppDNA)將腺苷基團(tuán)轉(zhuǎn)移到RNA 5’磷酸基團(tuán)的同時(shí)形成5’磷酸化DNA接頭(pDNA)的活性,從而減少了RNA的非特異性連接例如RNA串聯(lián)或自連成環(huán)。
另外,只能利用5’端預(yù)腺苷酰化的單鏈DNA或RNA作為3’端接頭,不消耗ATP,可大大降低連接反應(yīng)的背景,通常是克隆microRNA或建庫(kù)時(shí)的優(yōu)先選擇。
65℃熱處理20分鐘可使該酶失去活性。
產(chǎn)品圖片僅供參考,具體信息歡迎來(lái)電021-52992719咨詢。
應(yīng)用
(1) 將預(yù)腺苷酰化的 DNA 或 RNA 序列連接到任何 RNA 3'-末端
(2) 將單鏈腺苷酰化引物連接到小RNA上,用于cDNA文庫(kù)創(chuàng)建
(3) 克隆microRNA或建庫(kù)
優(yōu)勢(shì)
(1) 連接活性高;
(2) 連接特異性高,非特異性背景低。
信息
(1) 存放溫度:-20℃
產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格 |
重組T4 RNA連接酶2(截短型KQ) | YJ-O-111-2 | 2KU |
YJ-O-111-10 | 10KU | |
YJ-O-111-50 | 50KU |
