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引加生物的T4 DNA連接酶可以催化粘端或平端雙鏈DNA或RNA的5'-P末端和3'-OH末端之間以磷酸二酯鍵結合，該催化反應需ATP作為輔助因子。同時T4 DNA 連接酶可以修補雙鏈DNA、雙鏈RNA或DNA/RNA雜合物上的單鏈缺刻(single-strand nicks)。

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